Une nouvelle methode de production de proteines recombinantes

A l’ere de la proteomique (etude des proteines et de leurs fonctions) il apparait important d’avoir des outils varies et performants pour produire des proteines tres pures en grosses quantites. La production de proteines recombinantes dans la bacterie Escherichia coli suivie de sa purification presente de tres nombreuses applications tant pour la recherche fondamentale que pour la recherche appliquee. Par exemple, la cristallisation d’enzymes permet de determiner la conformation en trois dimensions de celle-ci,ce qui presente un grand interet en pharmacologie pour la recherche de ligands. Aussi la production d’anticorps necessite des proteines recombinantes en moins grosses quantites mais tres pures. Des chercheurs de l’Universite de Helsinki ont recemment modifie l’appareil de secretion flagellaire de type III de E. coli afin que les proteines recombinantes soient directement secretees du cytoplasme vers le milieu de culture. Cette nouvelle technique presente de nombreux avantages. En effet, l’accumulation de proteine dans les cellules bacteriennes peut presenter une certaine toxicite ce qui nuit a la croissance bacterienne et a une production efficace. D’autre part, la lyse (cassage) des bacteries est une etape delicate ou la proteine d’interet risque d’etre denaturee ou degradee. Par ailleurs, toutes les proteines intracellulaires sont liberees, ce qui necessite par la suite une purification sur colonne d’affinite de la proteine d’interet. Les concentrations de proteines recombinantes secretees obtenues sont tres exceptionnelles (1-15 mg/L) et representent plus de 50% de la totalite des proteines dans le milieu de culture. Par ailleurs, la presence d’etiquettes d’affinites ne semble pas nuire a la secretion d’ou la possibilite de purifier ulterieurement la proteine sur colonne d’affinite. Une application possible de ce systeme consiste a utiliser des banques de proteines issues de bacteries pathogenes afin d’identifier de proteines d’invasion ou d’adhesion produites pendant l’infection. Contacts : - D^r. Benita Westerlund-Wikstrom, Laboratoire de microbiologie generale - Faculte des Biosciences, Boite postale 56, FIN-00014 - Universite de Helsinki - tel : +358 9 191 59251 or -59250 - email : benita.westerlund helsinki.fi Sources : Majander et al (2005) Extracellular secretion of polypeptides using a modified Escherichia coli flagellar secretion apparatus. Nat Biotechnol. (en ligne le 3 avril 2005) Redacteur : Marie Aronson